Что такое культивирование гамет и эмбрионов

Содержание

Культивирование эмбрионов

Культивирование эмбрионов – один из важнейших этапов процедуры ЭКО. Врач – эмбриолог отбирает яйцеклетки и оплодотворяет их подготовленной спермой. После эмбрионы доращивают до стадии бластоцисты и самые жизнеспособные переносят в полость матки.

День забора яйцеклеток (пункции) специалисты чаще всего называют нулевым. После пункции яйцеклетки (ооцита) через несколько часов её оплодотворяют при помощи либо стандартного метода экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), либо методом интрацитоплазматической инъекции (ИКСИ).

Метод ЭКО применяют при женском бесплодии, а ИКСИ-метод чаще при мужском. После этого наступает следующий этап — культивирование эмбрионов, длительность этого этапа иногда достигает шести дней.

Для того чтобы понять, как происходит процесс, рассмотрим каждый день развития в отдельности.

Культивирование эмбрионов, день первый

В первый день развития у большинства ооцитов появляются первые признаки оплодотворения. К сожалению, не все яйцеклетки годные; в среднем около 10-15% от полученных яйцеклеток незрелые или дегенеративной формы, и являются непригодными к оплодотворению. Через 16-20 часов после инсеминации яйцеклетки наступает стадия презиготы.

При наличии в яйцеклетке двух пронуклеусов — мужского и женского (генетического материала, который еще не слился) — считается, что оплодотворение прошло благополучно. Иногда происходит гипероплодотворение, когда яйцеклетка оплодотворяется двумя и более сперматозоидами, такие эмбрионы отбраковываются. Встречаются случаи, когда по различным причинам оплодотворения вообще не происходит.

Перенос эмбриона в стадии пронуклеусов практикуется крайне редко. Главной причиной является то, что в организме женщины зародыш в данное время должен находиться в маточной трубе, а не в матке.

Ну и, конечно, отобрать пригодный эмбрион на данной стадии практически невозможно из-за отсутствия четких общепринятых показателей, а естественная выбраковка ещё не происходит.

Однако на стадии пронуклеусов практикуется криконсервирование (замораживание) оплодотворенных яйцеклеток.

Культивирование эмбрионов, день второй

На вторые сутки после оплодотворения яйцеклетки происходит дробление, то есть деление клетки на две, их называют бластомерами.

На данной стадии оценивается качество эмбриона, точнее, соотношение в цитоплазме объёмов зародыша и безъядерных фрагментов.

Специалисты утверждают, что чем больше ануклеарных (безъядерных) фрагментов, тем ниже потенциал к дальнейшему развитию и, соответственно, к имплантации. Кроме этого, оценивается ещё относительный размер бластомеров и его форма.

На вторые сутки перенос эмбриона в матку практикуют в тех случаях, если оплодотворились одна или две яйцеклетки. Так как пребывание вне организма и вредоносное воздействия в условиях культивирования было минимальным, что благоприятно для эмбриона, его переносят в матку, не дожидаясь стадии бластоцисты.

Культивирование эмбрионов, день третий

На третьи сутки количество бластомеров достигает шести — восьми клеток.

До этого момента эмбрион развивался исключительно на запасах яйцеклетки, накопленных в период созревания и роста ее в яичниках женщины.

Впоследствии природный процесс отбора сделает своё дело, всё зависит от различных хромосомных аномалий (которых могут нести в себе зародыши) — если они есть, эмбрион останавливается в развитии.

В мировой практике ЭКО на протяжении многих лет трансплантировали эмбрионы на 3 сутки из-за несовершенства техники в лабораториях. Когда стало доступно более длительное культивирование, всё более очевидным становилось, что на третьи сутки оценка жизнеспособности является не совсем надёжной.

Культивирование эмбрионов, день четвёртый

На четвертые сутки количество клеток увеличивается до шестнадцати бластомеров. Происходит процесс компактизации: уплотняются межклеточные контакты, сглаживается поверхность эмбриона.

Далее наступает стадия морулы. В организме матери именно в этот момент зародыш из маточной трубы попадает в полость матки.

Только в конце четвертых суток развития начинается процесс кавитации, когда внутри морулы образуется полость.

Перенос эмбриона в стадии морулы в матку максимально приближён к естественному физиологическому развитию событий, поэтому зачастую даёт замечательные результаты.

Культивирование эмбрионов, пятый и шестой день

На пятый-шестой день развития полость внутри морулы увеличивается и достигает 50% её объёма, с этого момента она называется бластоциста.

Состоит она из двух клеточных популяций: трофэктодермы и эмбриобласта. Трофэктодерма — полый пузырёк, формирующий внешний слой эмбриона, именно он участвует в прикреплении к эпителию матки и формировании ворсинок хориона.

Эмбриобласт располагается внутри трофэктодермического пузырька и, собственно, даёт начало телу плода.

Качество бластоцисты оценивается в основном по размеру полости, чем она больше и лучше развит эмбриобласт и трофэктодерма, тем больше потенциал эмбриона к благополучной имплантации.

Процесс освобождения (хэтчинга) эмбриона от блестящего слоя происходит после достижения полостью бластоцисты значительных размеров и растяжения, а впоследствии и разрыва блестящей оболочки.

Только после хэтчинга бластоциста способна прикрепиться в матке.

Перенос эмбриона на пятые-шестые сутки в современном мире делают чаще всего. По статистике, каждый второй зародыш в стадии бластоцисты успешно имплантируется. Это позволяет переносить всё меньше эмбрионов и тем самым уменьшать риск многоплодия, увеличивая частоту наступления беременности.

С появлением современных технологий культивирование эмбрионов стало возможным в более длительные сроки. Продлённое культивирование в специальных современных средах, отдельных для каждой стадии развития, имитирует микроокружение зародыша. Достигаются прекрасные результаты, бесплодие уже не является приговором.

Источник: https://www.rus-ivf.com/poleznoe/302-kultivirovanie-embrionov.html

Длительное культивирование эмбрионов in vitro. Культивирование гамет и эмбрионов — что это?

Уже более двадцати лет у пар, которые имеют проблемы с зачатием и рождением ребенка, появился шанс в виде программы экстракорпорального оплодотворения.

Конечно, на данный момент это достаточно дорогостоящая процедура, результат которой не всегда соответствует ожиданиям пациентов, но все-таки это шанс для тех, кто хочет генетически своего ребенка.

Культивирование эмбрионов дает возможность отобрать только самые жизнеспособные, а так же исключить некоторые генные заболевания.

Терминология

Экстракорпоральное оплодотворение – это направление репродуктивных технологий, которое подразумевает оплодотворение яйцеклетки матери вне матки и подсаживания готового эмбриона на сроке пять-семь дней.

Культивирование эмбрионов – это поддержание развития и жизнедеятельности зародышей человека перед подсадкой их в полость матки.

Этапы ЭКО

Процедура искусственного оплодотворения состоит из нескольких последовательных шагов или этапов: 1. Стимулирование суперовуляции, параллельно с мониторингом фолликулогенеза и нарастанием эндометрия. 2.

Пункция фолликулов. 3. Оплодотворение яйцеклетки и культивирование эмбрионов in vitro. 4. Искусственное поддержание лютеиновой фазы менструального цикла.

5. Подсадка эмбриона и диагностика беременности.

Для молодых женщин возможна процедура ЭКО без суперовуляции.

Показания и противопоказания к ЭКО

Рекомендацией для проведения данной врачебной манипуляции служит наличие у женщины бесплодия, не поддающегося обычно терапии, при условии, что ЭКО дает наибольшую вероятность зачатия.

К противопоказаниям же относятся:
— экстрагенитальные патологии, угрожающие прерыванием беременности; — пороки развития и деформации матки; — новообразования матки и яичников; — острые воспалительные заболевания (не только репродуктивной системы);

— наличие онкологии в анамнезе.

Подготовка к методу ЭКО

Первый этап – сбор анализов и выявление патологий. Для этого пациентке необходимо сдать анализ крови на половые гормоны, а так же развернутые общие анализы на биохимию и толлерантность к глюкозе. Проводится комплексная проверка на урогенитальные инфекции и ультразвуковое исследование внутренних репродуктивных органов.

Партнер обязан сделать спермограмму, чтобы убедиться в отсутствии мужского бесплодия. Обязательно взятие мазка на цитологию и кольпоскопия, дабы исключить предраковые состояния.

Будущей матери проводят исследование на TORCH инфекции (краснуха, токсоплазмоз, герпес, цитомегаловирус и хламидии), так как это может повлиять на развитие будущего плода.

В конце проводится УЗИ молочных желез и щитовидной железы.

Второй этап проводится непосредственно перед началом лечения.

Он состоит из трех пунктов: — супруги должны сдать тесты на ВИЧ, вирусные гепатиты, сифилис, получить результаты своей группы крови и резус-фактора; — женщине необходимо сдать анализы на сахар крови, общий анализ крови, мочи и биохимию, а так же знать время свертываемости;

— будущая мать должна иметь заключение терапевта о том, что отсутствуют противопоказания к беременности.

Порядок ЭКО

Сначала врач, после всех необходимых анализов, проводит стимуляцию яичников женщины с целью получить несколько здоровых яйцеклеток. Введение препаратов начинается на 21 день менструального цикла, и длиться целый месяц.

На протяжении этого времени врач постоянно контролирует, как созревает фолликул и нарастает эндометрий в полости матки при помощи ультразвука. А так же у женщины берутся анализы на гормоны, для того чтобы видеть всю картину целиком.

Как только яйцеклетки созревают, в амбулаторных условиях проводиться процедура их изъятия.

Однако этому процессу могут помешать некоторые факторы: — отсутствие реакции яичников на стимуляцию; — наличие спаек в полости малого таза; — преждевременная овуляция;

— ановуляторный цикл (когда созревшие фолликулы не содержат яйцеклетки). Все эти особенности нужно учитывать перед тем, как рекомендовать паре начинать процедуру ЭКО.

Как только будущий отец или анонимный донор сдадут свой генетический материал, можно проводить процедуру оплодотворения. Длительное культивирование эмбрионов in vitro необходимо для того, чтобы отобрать наиболее жизнеспособные зародыши.

Через пять-шесть дней после оплодотворения, несколько эмбрионов подсаживают в матку к матери. Через две недели, будущая мать сдает кровь на уровень хорионического гонадотропина человека (ХГЧ), чтобы определить наступление беременности.

Длительное культивирование эмбрионов

Чаще всего у пациентов, которые обращаются за столь специфической медицинской помощью, появляется много вопросов. Один из них звучит примерно так: «Культивирование гамет и эмбрионов, что это?», ответ достаточно простой и сложный одновременно. Это метод, благодаря которому зародыш остается жив до помещения его в тело матери.

Длительное культивирование эмбрионов in vitro дорогостоящая, высокотехнологичная процедура, требующая специфических знаний и навыков. Современные лаборатории постоянно совершенствуются в технике оплодотворения и оборудовании. Последняя новинка – культивирование эмбрионов в среде ЭмбриоГен.

Дополнительные факторы роста обеспечивают высокую вероятность имплантации зародыша в стенку матки.

Ранее, культивирование эмбрионов породили только до стадии дробления и помещали в матки уже через три дня после «зачатия», но они приживались только в четверти всех случаев ЭКО. Но после разработки метода культивирования эмбрионов in vitro до стадии бластоцисты, эффективность метода возросла. Для этого потребовались новые питательные среды и инкубаторы.

Плюсы и минусы процедуры

Такая процедура выводить культивирование эмбрионов на новый уровень.

Помогает отбирать самые перспективные, в плане имплантации, зародыши.
Уменьшается количество хромосомных аномалий, так как на стадии бластоцисты это можно отследить и предотвратить.
Имеет более физиологичный подход.
Снижается риск многоплодной беременности, потому что достаточно всего двух эмбрионов, вместо пяти, как раньше, чтобы наступила беременность.
Внематочная беременность встречается в разы реже, чем раньше.

Однако существуют и минусы данной процедуры. Первый заключается в том, что не все зародыши могут дорасти до необходимой стадии. Все-таки инкубаторные системы и питательные среды еще нужно совершенствовать, максимально приближая к естественным условиям.

И если выживает меньше четырех эмбрионов, то вероятность, что они будут готовы к подсадке, крайне мала. Второй минус, как и в предыдущих версиях ЭКО — отсутствие стопроцентной гарантии на успех.

Ни один врач-репродуктолог в мире не возьмется заявить, что этот метод является истинной в последней инстанции. Ученым еще есть к чему стремиться.

Побочные эффекты ЭКО

К нежелательным эффектам после ЭКО, во время, которого используется длительное культивирование эмбрионов, относятся: — многоплодная беременность, так как подсаживают сразу несколько эмбрионов; — внематочная беременность (нельзя исключить движения зародыша внутри матки);

— чрезмерная стимуляция яичников (синдром гиперстимуляции яичников приводит к бесплодию);

— инфекции и кровотечения.

Источник: https://FB.ru/article/259617/dlitelnoe-kultivirovanie-embrionov-in-vitro-kultivirovanie-gamet-i-embrionov---chto-eto

Зачем нужно культивирование эмбрионов в ЭКО. Длительное культивирование эмбрионов in vitro. Культивирование гамет и эмбрионов — что это?

Культивирование гамет и эмбрионов – это способ поддержания развития будущего эмбриона вне организма. Через 18 часов после соединения половых клеток определяют, произошло ли оплодотворение. Если результат положительный, яйцеклетки переносят на специальную среду, которая имитирует жидкость в просвете маточных труб.

Продолжительность культивирования может быть различной:

«базовая» длительность составляет 3-4 дня;
продолжительное культивирование – 5-6 дней.

Выбор срока культивирования зависит от различных факторов:

оснащенность клиники;
наличие специальных сред для пролонгированного культивирования;
количество полученных зигот;
состояние организма матери.

Если от женщины было получено мало яйцеклеток, а оплодотворилось 1-2, то используют перенос на 3 день.

Женщинам до 36 лет с 1 или 2 попыткой ЭКО рекомендуют выполнять подсадку одной бластоцисты на 5 день. Считается, что зародыш к 5 суткам более жизнеспособен, а состояние эндометрия оптимально для имплантации.

Среды для культивирования эмбрионов

До пересадки эмбриона в матку его растят в специальных условиях в инкубаторе. Каждый этап ЭКО протекает в своей среде, которая подобрана с учетом физиологии женского организма. Они стараются повторить процессы, происходящие в маточных трубах по мере продвижения по ним яйцеклетки. Среды для культивирования эмбриона отличаются по своим характеристикам:

Среды для последовательного культивирования до 3 дня. Состав доказано повышает частоту дробления, имеет оптимальный уровень рН 7.2, что способствует улучшению показателей развития зародыша. Как результат – большее количество подходит для подсадки. Состоят такие среды из заменимых аминокислот, альбумина, витаминов, лактата кальция, практически не содержат глюкозу.
Среды для культивирования до 5 дня содержит аминокислоты, большое количество глюкозы, фосфат, таурин и витамины. Концентрация веществ учитывает физиологические потребности бластоцисты.
Единые среды подходят для всех этапов ЭКО – от оплодотворения до культивирования и подсадки эмбриона. Вероятность имплантации увеличивает добавление гиалуроновой кислоты.

Этапы развития эмбриона

В оплодотворенной яйцеклетке ежедневно происходят изменения.

На 1 день оценивается, произошло ли оплодотворение. Яйцеклетка считается оплодотворенной, если в ней различимы 2 пронуклеуса – генетический материал родителей. На этом этапе отбраковывают неподходящий материал:

Если имело место оплодотворение двумя или тремя сперматозоидами;
Незрелые яйцеклетки, в которых не произошло оплодотворение.

Перенос в этот период не выполняют по двум причинам:

Яйцеклетка должна находиться в маточной трубе, а не в матке.
Нет критериев для определения жизнеспособной качественной яйцеклетки.

На 2 день происходит дробление яйцеклетки с образованием двух бластомеров. Специалисты оценивают формы бластомеров, количества безъядерных частей. Чем их больше, тем ниже потенциал клетки на дальнейшее развитие. Пересадку в этот день выполняют только при получении 1-2 яйцеклеток.

На 3 день образуется уже до 8 бластомеров. Если есть какие-то аномалии, то развитие эмбриона прекращается само. В этот день уже возможно выполнение подсадки, но критерии оценки ненадежны в определении жизнеспособности.

На 4 день 16 бластомеров образуют морулу, в которой постепенно образуется полость. В физиологических условиях она попадает в матку. Пересадка в этот день дает хорошие результаты по приживаемости эмбриона.

На 5-6 день полость внутри морулы увеличивается до половины ее объема, она переходит в стадию бластоцисты. Клетки внутри нее располагаются слоями, которые дадут начало телу зародыша и оболочкам с плацентой. Бластоциста освобождается от блестящей оболочки, которая покрывала ее снаружи. С этого момента она способна прикрепляться к стенке матки.

Перенос эмбриона на 5-6 день увеличивает количество прижившихся зародышей и успешных беременностей. По статистике приживается каждый второй зародыш. Это дает возможность подсаживать меньшее число бластоцист, что снижает вероятность многоплодных беременностей.

Протоколы культивирования в ЭКО

Данные о развитии клеток по дням заносятся в виде специальных буквенно-цифровых обозначений в протокол культивирования эмбрионов. Расшифровка отражает состояние клеток, бластоцист. Оцениваются такие показатели:

количество бластомеров по дням, день оплодотворения считают нулевым;
процент фрагментации обозначают буквами;
размер бластоцисты определяют по объему полости, присваивают номер от 1 до 6;
две буквы обозначают качество клеточной массы бластоцисты, первая – внутреннего слоя, вторая – трофобласта;

Качество клеток определяется классом, где 1(А) – отлично, а последний 4(D) – неудовлетворительно. Эмбрионы 4 класса не используются для подсадки и криоконсервирования.

Преимущества и недостатки каждого этапа культивирования

В каждых сутках культивирования есть положительные и отрицательные моменты для переноса эмбриона в организм женщины:

1 сутки. Преимущества столь короткого срока в том, что потенциальное вредное воздействие условий культивирования минимально. Проблемы переноса в матку связаны с тем, что физиологически в это время эмбрион должен находиться в фаллопиевой трубе (не в матке). К тому же, трудно оценить его качество.
2 сутки. Плюсы в том, что эмбрион недолго находится вне естественной среды и уже можно сделать первичный отбор качественных экземпляров, так как началось дробление. Минусы: еще нет возможности отделить эмбрионы с нарушениями генома, нельзя провести преимплантационную генетическую диагностику.
3 сутки. Положительный момент в том, что можно отделить эмбрионы, которые отстают в развитии или вовсе его прекратили. Недостатки такие же, как и на 2 сутки.
4 сутки. Положительный момент этого срока в том, что эмбрион достиг стадии, на которой происходит его перемещение из фаллопиевой трубы в матку, то есть введение его в полость будет близко к физиологическому. Столь длительное культивирование эмбрионов «in vitro» способствует преодолению «блока развития» – остановки дробления «в пробирке (стекле)». На этом сроке уже можно выполнить преимплантационную генетическую диагностику (ПГД). Недостаток: сложно оценить качество морул.
5 сутки. На этом сроке в 2 раза повышается вероятность имплантации бластоцист в сравнении с двух- или трехдневными эмбрионами. Произошел отбор наиболее сильных и качественных экземпляров, ими пережит «блок развития» «in vitro», можно выполнить ПГД, оценить качество бластоцист. Минусом можно назвать то, что если все эмбрионы остановились на более ранних стадиях, пациентки испытывают сильный стресс, переживают утрату возможности забеременеть.

Качество

5 клеточный эмбрион считается нормой и достаточно часто применяется в медицинской практике. Для того, чтобы процедура ЭКО прошла успешно, обязательно проводится культивирование гамет. Качество эмбрионов для переноса при ЭКО зависит от многих факторов.

От чего зависит качество эмбрионов при ЭКО:

экология;
вредные привычки;
наличия заболевания половых органов;
иммунная система;
лишний вес;
несбалансированное питание;
стрессовые ситуации;
гормональные сбои.

Классы эмбрионов в ЭКО говорят о качестве биоматериала, от которого зависит исход процедуры.

Качество эмбрионов и их классы тесно связаны друг с другом.

Существует 4 класса:

класс А – полностью отсутствую безъядерные фрагменты;
класс В–не более 20% безъядерных фрагментов от общего объема;
класс С – содержание ануклеарных фрагментов от 21% до 50%;
класс D – содержится более 50% безъядерных фрагментов, категория не используется для дальнейшего проведения процедуры.

Источник: https://GolovaNeBoli.ru/diety/kultivirovanie-gamet-i-embrionov-v-eko.html

Общее понятие об ЭКО: этапы процедуры, показания к назначению

Экстракорпоральное оплодотворение подразумевает, что само зачатие происходит не в женском организме, а в условиях лаборатории. Если в силу определённых обстоятельств женщина не может забеременеть, а устранение этих факторов затруднено или невозможно, ЭКО даёт высокие шансы выносить и родить малыша даже с наличием некоторых проблем со здоровьем у мужчины или у женщины.

ЭКО назначается в случаях, когда у пациентки диагностирована непроходимость маточных труб, либо если они были удалены, если у мужчины отмечается низкое количество или малая активность сперматозоидов, или же если ранее осуществлялось 2-4 цикла стимуляции овуляции или внутриматочной инсеминации, но они прошли безуспешно.

Если у женщины выявлено малое количество яйцеклеток, этот фактор может быть показанием к проведению ЭКО с использованием донорских яйцеклеток.

ЭКО эффективно и при эндометриозе – заболевании, вызывающем неконтролируемое разрастание слизистой оболочки матки.

Вся процедура является достаточно сложной и длительной, она осуществляется в несколько этапов, расположенных в строгой последовательности.

Изначально пара проходит общее клинико-биохимическое обследование, чтобы обнаружить наличие показаний или противопоказаний к ЭКО.

Следующим шагом является разработка протокола ЭКО – под этим термином понимается режим введения гормональных препаратов, призванных стимулировать яичники на выработку яйцеклеток.

Препараты могут вводиться перорально, внутривенно, внутримышечно, обязательно в строго определённом порядке и под наблюдением доктора.

Как только яйцеклетки созревают, их извлекают хирургическим путём, и подвергают оплодотворению мужской спермой в лабораторных условиях.

Следующий этап – культивирование эмбрионов в стерильной среде инкубатора. В среднем, этот период занимает от 2 до 6 дней. Всё это время оплодотворённые яйцеклетки находятся под наблюдением специалистов-репродуктологов.

По достижению эмбрионами нужной стадии развития, они переносятся в полость матки женщины. Обычно в матку вживляются два эмбриона, второй переносится туда спустя некоторое время после первого, чтобы увеличить вероятность беременности.

Далее медики переходят к поддержке лютеиновой фазы менструального цикла – этапа, когда организм производит гормональную подготовку матки к беременности.

Суть процесса культивирования эмбрионов

Процесс культивирования представляет собой создание условий для оплодотворения яйцеклетки, а также наблюдение за развитием из неё эмбрионального организма.

Особенность этого процесса заключается в том, что клеточное развитие происходит не в естественных условиях, а в искусственно созданной среде.

Состав и качество такой среды идентичны содержимому маточных труб, состоянию стенок и полости матки.

Как происходит подготовка к забору (пункции) яйцеклеток

Культивирование эмбрионов подразумевает необходимость физического изъятия яйцеклетки из яичника женщины. Подобная процедура требует обязательной подготовки, правила которой женщина начинает соблюдать заранее. За пять дней следует избегать половых актов, отказаться от употребления спиртного, жареной, копчёной, жирной пищи. Запрещено посещать баню, сауну, принимать горячие ванны.

Накануне процедуры следует:

отказаться от ужина (кушать разрешено не позже 17:30);
снять лак или любое покрытие с ногтевых пластин;
не употреблять жидкость после 24:00.

Утром перед пункцией запрещено курить, кушать, пить, жевать жевательную резинку. Если женщина носит контактные линзы, на время операции их лучше не надевать.

Дата проведения процедуры должна соотноситься со временем естественной овуляции.

Техника проведения пункции яйцеклеток

По сути, процедура не особенно отличается от трансвагинального УЗИ. Во влагалище пациентке вводится специальный датчик, который выводит на экран аппарата изображение. Однако, в отличие от УЗИ, датчик имеет специальную насадку – устройство для пунктирования.

Пациентку могут погрузить в состояние медикаментозного сна, или осуществить местное обезболивание, так как сама по себе процедура причиняет некоторый дискомфорт и болевые ощущения.

Проведя осмотр близлежащих органов, медик изучает состояние, размеры и расположение яичников непосредственно перед пункцией.

Далее доктор, используя направляющую линию датчика, определяет точность попадания пункционной иглы в фолликул. После этого, из устройства выдвигается сама игла, которая прокалывает стенку влагалища и фолликул.

Прибор всасывает в себя содержимое фолликула по такому же принципу, как происходит забор крови из вены – давлением воздуха. Аспирационная игла втягивается в прибор, после чего он извлекается из влагалища. Содержимое фолликула, вместе с яйцеклеткой, определяется в специальную стерильную пробирку. Процедура повторяется, пока нужное количество яйцеклеток не будет изъято из фолликула.

Весь процесс обычно длится 10-15 минут. Если же у женщины присутствует большое количество созревших яйцеклеток, процедура пункции может продолжаться и 40-50 минут.

В следующие два дня после операции, женщина может ощущать слабость, тянущие боли в нижней части живота, сонливость. Допускаются незначительные кровянистые выделения из влагалища.

Этап культивирования эмбрионов в процессе осуществления ЭКО

После забора яйцеклеток, их подвергают оплодотворению – обычно это происходит через несколько часов после пункции. С момента, когда доктор проводит оценку факта наступления оплодотворения, отсчитывается начало этапа культивирования. День процедуры пункции фолликулов считается нулевым.

В целом, этап культивирования занимает до шести дней.

Первый день. Доктор осматривает ооциты (яйцеклетки, которые подвергались оплодотворению). У большинства из них уже обнаруживаются признаки успешного оплодотворения. Однако, из всех наличествующих ооцитов, примерно 10-15% являются непригодными для дальнейшей культивации, так как являются незрелыми или имеют дегенеративные формы.

Через 16-20 часов после инсеминации у яйцеклеток наблюдается стадия презиготы: в клетке уже присутствуют мужской и женский типы генетического материала, которые ещё не слились в единое целое. В таком случае считается, что оплодотворение прошло успешно.

Существуют случаи, когда одну яйцеклетку оплодотворяют два и более сперматозоида – такие зародыши отбраковываются и не участвуют в дальнейшем в процессе культивации. Возможно и полное отсутствие результата инсеминации, когда не оплодотворяется ни одна яйцеклетка.

В этот период времени оплодотворённую клетку могут подвергнуть консервации.

Крайне редко в первый день осуществляется перенос зиготы в женский организм: во-первых, на этой стадии эмбрион ещё должен некоторое время находиться в маточных трубах, а не в матке, во-вторых, медики предпочитают ждать наступления этапа естественной выбраковки эмбрионов, а также проявления у них любых показателей, по которым можно отобрать наиболее удачный для дальнейшей беременности эмбрион.

Второй день. В оплодотворённых яйцеклетках происходит их дробление на две части – бластомеры. В этот период медики уже могут оценить качество зародыша по соотношению объёма зародыша к безъядерным фрагментам в цитоплазме. Клетки, в которых количество безъядерных элементов превышает по объёму сам зародыш, считаются материалом с низким потенциалом к имплантации.

Если на второй день возможно отобрать одну или две яйцеклетки подходящего качества, их могут уже вживить в женский организм.

Третий день. В это время количество оплодотворённых бластомеров приближается к 6-8 клеткам.

В течении первых двух дней развитие эмбриона происходило за счёт ресурсов, накопленных яйцеклеткой в период её созревания в яичнике.

Если у клетки присутствуют хромосомные патологии, на третий день она останавливается в развитии, то есть в действие вступает так называемый процесс естественной отбраковки.

Долгое время с момента изобретения метода ЭКО, трансплантация эмбриона происходила именно в этот день, так как более длительный процесс культивирования был недоступен из-за несовершенства существующей на тот момент лабораторной техники. Сейчас эта проблема решена развитием более современных технологий ЭКО.

Четвёртый день. Количество бластомеров доходит до 16 штук. В этот период начинается процесс компактизации клеток. Он заключается в том, что межклеточные контакты уплотняются, а поверхность эмбриона сглаживается.

Четвёртый день характеризуется также началом стадии морулы. В женском организме в это время зародыш переходит по маточным трубам в полость матки. Именно поэтому имплантация эмбриона часто происходит именно в такой момент.

В конце четвёртого дня в моруле образуется полость.

Пятый и шестой день. Зародыш переходит в стадию бластоцисты, когда объём внутренней полости морулы достигает более 50% общего её объёма. Бластоциста состоит из трофэктодермы и эмбриобласта.

Трофэктодерма относится к внешнему слою эмбриона – она отвечает за его прикрепление к эпителию матки. Эмбриобласт формирует начальное развитие тело плода, и представляет собой совокупность клеток внутри трофэктодермического пузыря.

На этом заключительном этапе процесса культивации у медиков есть возможность оценить качество бластоцисты по размеру её полости, по степени развития её составных частей (трофэктодермы и эмбриопласта).

Наиболее эффективно имплантация зародыша осуществляется именно на пятый или шестой день культивации.

По статистике, каждый второй эмбрион шестого дня помещается в матку с дальнейшим успешным исходом. Таким образом удаётся избежать проявлений многоплодия и переноса большого количества эмбрионов в матку для увеличения степени успешности процедуры ЭКО.

Криокультивация эмбрионов: процесс консервации

В некоторых случаях инсеминация яйцеклеток даёт больше 2-3 успешно оплодотворённых зародышей. В случае, если их количество достигает 8-10 штук, медики могут рекомендовать заморозить их. Если первая процедура ЭКО пройдёт неудачно, у пары уже будет материал для следующей попытки.

Для заморозки подходят яйцеклетки, только что прошедшие процесс оплодотворения, бластоцисты, а также четырёх- и восьмиклеточные эмбрионы.

Процесс переноса ранее замороженных яйцеклеток требует некоторой подготовки, при этом пункция и стимуляция яичников исключается. Для женщин с нормальным менструальным циклом и овуляцией, перенос законсервированных зародышей назначается на 7-10 день с начала цикла овуляции.

Если же цикл нарушен, сперва его восстанавливают посредством проведения гормональной терапии.

Проведение ЭКО с использованием замороженных клеток несколько снижает шансы успешного достижения беременности.

Успешность лабораторного этапа ЭКО, в том числе, процесса культивации эмбрионов, зависит от качества исходного биологического материала – сперматозоидов и яйцеклеток, а также от опыта и квалификации медиков, осуществляющих процесс культивации. Культивация занимает до 6 дней, при этом наиболее успешно проходит имплантация, осуществлённая именно на пятый или шестой день развития зародыша.

Источник: https://FoodandHealth.ru/meduslugi/kultivirovanie-embrionov/

Культивирование гамет и эмбрионов в эко

После оплодотворения яйцеклетки нуждаются в подращивании в специальных средах. За ними наблюдают на протяжении нескольких дней, а затем выбирают более качественные для подсадки.

Что такое культивирование в ЭКО?

Продолжительность культивирования может быть различной:

«базовая» длительность составляет 3-4 дня;
продолжительное культивирование – 5-6 дней.

Выбор срока культивирования зависит от различных факторов:

оснащенность клиники;
наличие специальных сред для пролонгированного культивирования;
количество полученных зигот;
состояние организма матери.

Если от женщины было получено мало яйцеклеток, а оплодотворилось 1-2, то используют перенос на 3 день.

Когда культивирование невозможно?

Для культивирования эмбрионов противопоказаний нет, но при наличии следующих факторов не рекомендуется прибегать к ЭКО без предварительного лечения:

миома;
злокачественные опухоли;
воспалительные или инфекционные процессы;
обострение хронических заболеваний;
отсутствие матки.

Метод подращивания эмбрионов повышает процент наступления беременностей. При выборе срока культивирования врач должен отталкиваться от состояния конкретной пациентки.

Юлия Шевченко, акушер-гинеколог, специально для Mirmam.pro

Источник: https://mirmam.pro/kultivirovanie

Оптимальные условия для культивирования эмбрионов

Этап культивирования начинается с момента передачи эмбриологу яйцеклеток, полученных в процессе пункции яичников. Женские половые клетки очень требовательны к условиям внешней среды.

Главной задачей эмбриолога является поддержание температурного режима в очень узком коридоре: от 34 °С до 37,5 °С во всех емкостях, где будут находиться яйцеклетки.

И чем быстрее яйцеклетки будут перенесены из фолликулов в инкубатор, тем лучше.

На этапе культивирования наряду с поддержанием оптимальной температуры на развитие эмбриона влияет и газовый состав инкубатора. На сегодняшний день практически все современные инкубаторы содержат 6 % углекислого газа.

Основные культуральные среды также адаптированы к данному показателю СО2. Эмбриологические среды, насыщаясь углекислотой, приобретают нужную кислотность, что обеспечивает оптимальные условия для развития эмбриона. Кроме углекислого газа эмбриологи следят и за содержанием кислорода.

Он является сильным окислителем, под воздействием которого образуются свободные радикалы, способные нарушить развитие эмбрионов. Если в воздухе содержание кислорода 20,9 %, то в матке и фаллопиевых трубах этот показатель не выше 5 %.

Чтобы избежать отрицательного влияния свободных радикалов на яйцеклетки и эмбрион, содержание кислорода в газовом составе инкубатора также не должно превышать 5 %.

Значимость системы вентиляции в эмбриологической лаборатории

Еще одним важным условием эффективной работы эмбриологической лаборатории являются условия газообмена в помещении.

Обычное проветривание, простая система вентиляции – все это не способно обеспечить нужный уровень очищения воздуха.

Иначе любые запахи за стеной, будь то дорогой парфюм или запах краски, моментально просачивались бы в лабораторию и отрицательно влияли на развитие эмбрионов.

Качество культивирования эмбрионов зависит от уровня оснащенности эмбриологической лаборатории

Клиника «ЭКО на Петровке» оборудована современной многоуровневой системой очищения воздуха, включая угольную фильтрацию. Обмен воздуха в эмбриологической лаборатории происходит ежеминутно. Это значит, что 60 раз в час воздух в помещении полностью обновляется.

В чем плюсы культивирования эмбрионов до стадии бластоцисты?

До 2003 года все клиники России культивировали эмбрион до 2–3 суток. Поскольку условия в эмбриологической лаборатории были неудовлетворительными, эмбрион старались переносить в полость матки как можно раньше, чтобы повысить успешность ЭКО.

Сегодня ситуация изменилась.

Поддержание идеального газового состава в инкубаторе, наличие оптимальных культуральных эмбриологических сред – все это позволяет создать необходимые условия для более длительного культивирования эмбрионов до стадии бластоцисты.

Бластоциста – это эмбрион на 5–6-е сутки своего развития, который состоит из внешней оболочки (трофэктодермы) и внутренней клеточной массы.

Преимущества выращивания эмбрионов до стадии бластоцисты:

Отсеивание нежизнеспособных эмбрионов. Бывают случаи, когда до 3 суток эмбрион нормально растет, а после 3–4-х суток его развитие прекращается. В день оплодотворения образуется одна клетка – зигота, на 2-й день в результате процессов деления эмбрион состоит уже из 4 клеток. На 3-и сутки – из 8 клеток. Если на 3, 4, 5-е сутки количество клеток остается неизменным или появляются признаки дегенерации, это говорит о нежизнеспособности эмбриона. Его перенос точно не даст беременности.

Деление клеток эмбриона происходит очень активно, и с каждым днем наряду с ростом количества клеток у эмбриона появляются новые структуры

Отсеивание эмбрионов с аномальным набором хромосом. В 60–80 % случаев причиной ранних выкидышей являются хромосомные аномалии эмбриона. Культивирование до стадии бластоцисты позволяет провести преимплантационную генетическую диагностику, не повредив при этом эмбрион и не снизив его шансы на успешную имплантацию. Забор материала для генетического исследования берут из оболочки бластоцисты – трофэктодермы, что обеспечивает высокую диагностическую информативность анализа (так как врач изучает не одну, а несколько клеток) при минимальной потере клеточной массы. Для сравнения: в связи с большой потерей клеточной массы проведение ПГД на третьи сутки существенно снижало шансы на получение беременности.

Специалисты клиники «ЭКО на Петровке» проводят культивирование эмбриона до 5–6 суток, что позволяет путем естественного отбора отсеять значительную часть заведомо нежизнеспособные и аномальные эмбрионы. Благодаря этому удается значительно повысить шансы на получение здоровой беременности после первого же переноса.